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花青素检测

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 花青素检测 

植物源性食品中花青素的测定

  植物源性食品中花青素的测定高效液相色谱法

  1范围

  本标准规定了植物源性食品中的飞燕草色素、矢车菊色素、矮牵牛色素、天竺葵色素、芍药素和锦葵 色素共6种花青素的高效液相色谱测定方法。

  本标准适用于植物源性食品中花青素含量的测定。

  本标准的检出限:以称样量为1 g,定容体积为50 mL计,飞燕草色素、矢车菊色素、天竺奏色素、芍 药素和锦葵色素5种花青素的检出限均为0. 15 mg/kg;矮牵牛色素的检出限为0. 5 mg/kg。同样条件 下定量限:飞燕草色素、矢车菊色素、天竺葵色素、芍药素和锦葵色素5种花青素均为0. 5 mg/kg;矮牵 牛色素为1.5 mg/kg。

  2规范性引用文件

  下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

  GB/T 6379. 1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义 GB/T 6379. 2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法

  GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

  3原理

  植物源性食品中的花青素主要以花色苷的形式存在。试样经乙醇一水的强酸溶液超声提取花色苷后,经沸水浴将花色苷水解成花青素,用高效液相色谱法测定,以保留时间定性,外标量。

  4试剂和材料

  除非另有规定,仅使用分析纯试剂。水为GB/T 6682规定的一级水。

  4.1无水乙醇(C2H5OH):色谱纯。

  4.2甲酸(CH2Oz):色谱纯。

  4.3甲醇(CH3OH):色谱纯。

  4.4盐酸(HCl):优级纯。

  4.5提取液:无水乙醇+水+盐酸=2+l + l(V+V+V),取200 mL无水乙醇、lOOmL水和lOOmL 盐酸混匀。

  4.6 10%盐酸甲醇溶液(体积比):取10 mL盐酸、90 mL甲醇混匀。

  4.7 飞燕草色素(Delphinidin) : CAS 号 528 - 53 - 0,纯度≥96 %。

  4. 8 矢车菊色素(Cyanidin) : CAS 号 528 - 58 - 5,纯度≥98 %。

  4.9 矮牵牛色素(Petunidin chloride) :CAS 号 1429 - 30 - 7,纯度≥96%。

  4.10天竺葵色素(Petunidin):CAS号134-04- 3,纯度≥96%。

  4. 11 芍药素(Peonidin) :CAS号 134-01-0,纯度≥98%。

  4. 12 锦葵色素(Malvidin) :CAS 号 643 - 84 - 5,纯度≥96%。

  4.13单标储备溶液

  分别准确称取飞燕草色素(Delphimdin)、矢车菊色素(Cyanidin)、矮牵牛色素(Petunidin chloride)、 天竺葵色素(Pelargomdin)、芍药素(Peonidm)和锦葵色素(Malvidin)共6种花青素标准品5. 0 mg,用 10%盐酸甲醇溶液(4. 6)溶解并分别定容至10 mL容量瓶中,即为500 mg/ L的单标储备液,于 -18°C 下,贮存于密闭的棕色玻璃瓶中,保存有效期为6个月。

  4.14 混合标准使用液

  在使用中将单一标准储备液进行混合后,用10%盐酸甲醇溶液(4. 6)作为溶剂,并逐级稀释成 0.5mg/L、l. 0 mg/L、5. 0 mg/L、25. 0 mg/L、50. 0 mg/L或其他浓度的花青素混合标准使用液。在4℃条 件下,有效期为6个月。

  4.15 滤膜:0.45 μm,水相滤膜。

  5 仪器与设备

  5.1高效液相色谱仪带

  紫外或二极管阵列检测器。

  5.2 天平:精度 0.01mg,0.01g。

  5.3 水浴锅:精度±2℃。

  5.4 匀浆机。

  5.5 超声波清洗机。

  5.6 粉碎机。

  6 分析步骤

  6.1 试样制备

  采用四分法分取样品,含水率高的样品,如葡萄、茄子等,取约200 g于匀浆机中匀浆;含水率低的样品,如黑米、黑豆等,用粉碎机进行粉碎,过250 的筛。所有样品在 -18°C条件下保存。

  6.2提取

  根据样品中花青素含量,称取样品1.00g〜10.00g于50 mL具塞比色管中,加人提取液(4. 5)定容至刻度,摇匀1 min后,超声提取30 min。

  6.3水解

  超声提取后,于沸水浴中水解1 h,取出冷却后,用提取液a 5)再次定容。静置,取上清液,用0. 45 水相滤膜过滤,待测。样品制备好后,在4°C条件下,保存时间不超过3 d。

  6.4测定

  6.4.1 色谱参考条件

  a) 色谱柱:C18柱,250 mm × 4. 6 mm × 5 μm或性能相当者;

  b) 流动相A为含1 %甲酸水溶液,流动相B为含1%甲酸乙腈溶液;

  c) 检测波长:530 nm;

  d) 柱温:35°C;

  e) 进样量:20 μL;

  f) 梯度洗脱条件,见表1。

时间,min 流速,mL/min 流动相A,% 流动相B,%
0. 0 0.8 92. 0 8. 0
2. 0 0. 8 88. 0 12. 0
5. 0 0.8 82 18
10. 0 0.8 80. 0 20. 0
12 0.8 75. 0 25. 0
15 0.8 70 30
18 0.8 55 45
20. 0 0.8 20 80
22 0.8 92. 0 8. 0
30 0.8 92 8. 0

  6.4.2色谱分析

  分别将标准溶液和试样溶液,注人液相色谱仪中,以保留时间定性,以样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。色谱图参见附录A。

  7 结果计算

  样品中花青素含量为6种花青素含量之和。其含量以质量分数w计,单位为毫克每千克(mg/ kg),按式⑴计算。

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